ОКРАСКА ПО ГРАМУ 100 (ФУКСИН)

Инструкция для печати (в формате pdf)

Набор реагентов предназначен для выявления микроорганизмов в мазках крови, мочи, мокроте и других биологических жидкостях, дифференциальной окраски и выявления принадлежности бактерий к грамположительным или к грамотрицательным группам. Набор может применяться в клинико-диагностических и биохимических лабораториях, а так же в научно-исследовательской практике.

Набор реагентов рассчитан на проведение 100 определений при расходе по 1,0 мл рабочего раствора красителей на один анализ.

Прокариотические микроорганизмы различаются химическим составом клеточной стенки. Микроорганизмы, стенки которых способные удерживать комплекс красителей трифенилметанового ряда с йодом при обесцвечивании и окрашиваться при этом в темный сине-фиолетовый цвет называются грамположительными. Микроорганизмы, которые теряют при обесцвечивании этот комплекс, называются грамотрицательными и дополнительно окрашиваются в красный или розово-красный цвет раствором фуксина.

1. Раствор генциана фиолетового (фенол – 10 г/л, кристаллический фиолетовый – 10 г/л, спирт этиловый – 10%), 100 мл – 1 флакона.

2. Раствор Люголя (йод – 3,3 г /л, калий йодистый – 6,7 г/л), 100 мл – 1 флакон.

3. Раствор фуксина Циля (фенол – 50 г/л, основной фуксин – 10 г/л, спирт этиловый 10%), 10 мл – 1 флакон.

При использовании данного набора грамположительные бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные – розово-красный.

Процедура окрашивания мазков не превышает 10 минут.

Раствор генциана фиолетового и раствора фуксина по Цилю содержат в своем составе едкое вещества – фенол. Раствор Люголя содержит раздражающее вещество – йод. В случае попадания этих растворов на кожу и (или) слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством воды. Пипетирование per os категорически запрещается.

При работе с биологическим материалом человека необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в бактериологической лаборатории, т.к. любые исследуемые образцы биологического материала следует рассматривать как потенциально инфицированные.

– спиртовка или газовая горелка;

– секундомер или песочные часы;

– вода дистиллированная;

– спирт этиловый 96% или ацетон-спиртовая смесь 1:1;

– перчатки резиновые или пластиковые.

Цельная кровь, моча, мокрота, спинномозговая жидкость, серозные жидкости полостей.

Раствор генциана фиолетового и раствор Люголя готовы к применению. 

Рабочий раствор фуксина (фуксин Пфейфера) готовиться путем разведения раствора фуксина Циля дистиллированной водой в 10 раз.

Рабочий раствор фуксина хранить в темном месте в плотно укупоренной посуде при температуре +18-25° С не более 1 суток

Предметные стекла перед использованием необходимо тщательно вымыть и обезжирить. Нанести на стекло мазок исследуемой биологической жидкости (крови, мочи и т.д.) и высушить его на воздухе. Мазок зафиксировать химическим или физическим способом. Для химической фиксации мазок опускают с метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (этиловый 96% спирт и диэтиловый эфир в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этиловый спирт 96%, хлороформ, ледяная уксусная кислота в соотношении 6:3:1). При физической фиксации, предметное стекло с тщательно высушенным мазком, проводят над верхней частью пламенем горелки мазком вверх в течение 2–3 секунд. Для контроля надежности фиксации стекло можно приложить к тыльной части кисти. При правильном прогреве стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70–80° С).

1. На фиксированный мазок поместить фильтровальную бумагу и нанести 3–5 капель раствора генциан фиолетового. Выдержать 1–2 минуты.

2. Слить краситель и, не промывая препарат водой, налить на мазок 1 мл раствор Люголя и выдержать 1–2 минуты.

3. Слить раствор Люголя и, не промывая препарат погрузить его в 96% этиловый спирт, периодически покачивая стекло пока от мазка не перестанут отходить облачка краски. В среднем это занимает около 1 минуты. Если  воспользоваться ацетон-спиртовой смесью (соотношении 1:1) то время смыва можно сократить до 2–5 секунд.

4. Ополоснуть мазок дистиллированной водой.

5. Докрасить мазок в течении 1 минуты, нанеся на него 3–5 капель раствора фуксина (фуксин Пфейфера).

6. Слить фуксин со стекла, промыть мазок водопроводной водой и высушить от остатков воды фильтровальной бумагой.

7. Микроскопировать под масляной иммерсией.

При правильном проведении окрашивания грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовую окраску, а грамотрицательные – розово-красную.

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–25° С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре от -10° С до +35° С не более 5 суток.

Срок годности набора – 1 год.

Раствор генцианового фиолетового и раствор Люголя после вскрытия можно хранить в плотно закупоренной упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности.