ГЛЮКОЗА АГАТ

Регистрационные удостоверения (Россия, Казахстан, Украина)

Каталожный № 10757 (400 мл) КУПИТЬ 

Каталожный № 19078 (200 мл) КУПИТЬ              УТВЕРЖДАЮ

Набор предназначен для количественного и качественного колориметрического определения концентрации глюкозы в сыворотке и плазме крови, цельной крови и моче человека глюкозооксидазным методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и в научно-исследовательской практике. Набор рассчитан на проведение 400 определений при расходе 1,0 мл рабочего раствора на один анализ.

Глюкозоксидаза окисляет D-глюкозу до глюкуроновой кислоты с образованием перекиси водорода; последняя под действием пероксидазы реагирует с 4-аминоантипирином и фенолом с образованием соединения красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации глюкозы в анализируемом образце и измеряется фотометрически при длине волны 510 (470–540) нм.

1. Концентрат буфера с фенолом (фенол — 20,7 г/л, калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный — 137 г/л, калий фосфорнокислый однозамещенный — 55 г/л), 10 мл — 2 флакона.

2. Субстратно-ферментная смесь сухая (4-аминоантипирин — 0,032 г, глюкозооксидаза — 3000 МЕ, пероксидаза — 300 МЕ) — 2 флакона.

3. Антикоагулянт сухой (натрий хлористый — 4,2 г, натрий фтористый — 0,11 г, этилендиамин-N,N,N`,N`-тетрауксусной кислоты динатриевая соль 2-водная — 0,2 г) — 1 упаковка.

4. Калибровочный раствор глюкозы (глюкоза — 10 ммоль/л, бензойная кислота — 1,8 г/л), 2,0 мл — 1 флакон.

Линейная область определения концентрации глюкозы — в диапазоне от 2 до 20 ммоль/л, отклонение от линейности — не более 5%.

Чувствительность определения — не более 1 ммоль/л.

Воспроизводимость: коэффициент вариации не более 5%.

Нормальные величины концентрации глюкозы составляют:

     — для сыворотки крови и плазмы крови 3,9–6,1 ммоль/л;

     — для цельной крови 3,3–5,5 ммоль/л;

     — для мочи не более 0,5 ммоль/л.

Качество набора можно оценивать по контрольным сывороткам отечественного или зарубежного производства, аттестованными данным методом. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента.

При работе с набором необходимо соблюдать правила техники безопасности, рекомендуемые при работе с кровью в соответствии с «Инструкцией по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебных и профилактических учреждений», утвержденной Минздравом СССР от 17.01.91 г. и «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (М., 1981 г.). При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

— Спектрофотометр, длина волны 510 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 470–540 нм (зеленый светофильтр), кювета с толщиной поглощающего свет слоя 10 или 5 мм;

— пипетки, позволяющие отбирать объем жидкости 0,01 и 1,0 мл;

— колбы мерные вместимостью 200 и 500 мл;

— пробирки центрифужные вместимостью 5–10 мл;

— термостат, обеспечивающий температуру +37° С;

— центрифуга лабораторная на 3000 об/мин;

— секундомер; — вода дистиллированная;

— перчатки резиновые или пластиковые.

Негемолизированная сыворотка или плазма крови, цельная кровь, моча.

Рабочий раствор. В мерной колбе вместимостью 200 мл последовательно растворить в дистиллированной воде содержимое одного флакона концентрата буфера с фенолом и одного флакона сухой субстратно-ферментной смеси, затем довести объем дистиллированной водой до метки. Рабочий раствор можно хранить в темном месте в плотно укупоренной посуде при температуре +2–8° С не более 1 месяца.

Антикоагуляционный раствор (для определения глюкозы в цельной крови). Содержимое упаковки с сухим антикоагулянтом количественно перенести в мерную колбу вместимостью 500 мл, растворить в дистиллированной воде и довести объем дистиллированной водой до метки. Антикоагуляционный раствор можно хранить в плотно укупоренной посуде при температуре +2–8° С не более 3 месяцев.

Калибровочный раствор глюкозы готов к применению.

Компоненты реакционной смеси внести в пробирки в количествах, указанных в таблице 1.

Таблица 1

Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 минут при температуре +37° С или в течение 30 минут при комнатной температуре (+18–25° С). Через 5–10 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхнуть. После окончания инкубации измерить величину оптической плотности калибровочной и опытных проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 510 (470–540) нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 или 5 мм. Окраска устойчива в течение 1 часа после окончания инкубации.

Концентрацию глюкозы рассчитать по формуле:

где: С — концентрация глюкозы в опытной пробе, ммоль/л;

       Eо — оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плотн.;

       Eк — оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.;

       10 — концентрация глюкозы в калибровочном растворе, ммоль/л.

Примечание: при использовании кювет другого объема расход реагентов может быть пропорционально изменен с сохранением соотношения объема анализируемого образца к объему рабочего раствора 1:100.

Компоненты реакционной смеси внести в пробирки в количествах, указанных в таблице 2.

Таблица 2

Дальше определение, измерение оптической плотности и расчеты проводить так, как это указано для сыворотки (плазмы) крови.

В центрифужной пробирке смешать 0,2 мл рабочего раствора, 0,02 мл мочи и инкубировать в течение 15–20 минут при комнатной температуре (+18–25° С). Пробы мочи, вызывающие покраснение реакционной смеси, считать положительными.

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре +25° С не более 5 суток. Срок годности набора — 2 года. Рабочий раствор может хранится в темном месте в плотно укупоренной посуде при температуре +2–8° С не более 1 месяца. Антикоагуляционный раствор может храниться в плотно укупоренной посуде при температуре +2–8° С не 3 трех месяцев. Калибровочный раствор глюкозы после вскрытия флакона может храниться в укупоренном виде при температуре +2–8° С не 3 трех месяцев. При получении значений концентрации глюкозы выше 20 ммоль/л анализируемый образец необходимо развести дистиллированной водой в соотношении 1:1, повторить анализ и полученный результат умножить на 2.

Инструкция составлена: к.б.н. И.В. Смирновым — зав. лабораторией ГНЦ РАМН, В.В. Майоровой — научным сотрудником ООО «Агат-Мед».