ЖСС АГАТ

Инструкция для печати (в формате pdf)

НАЗНАЧЕНИЕ 

Диагностический набор предназначен для количественного определения железосвязывающей способности сыворотки крови в клинико-диагностических и биохимических лабораториях.

Набор рассчитан на 40 определений при общем объеме реакционной смеси 3,52 мл на один анализ.

В щелочных условиях к сыворотке добавляется избыток ионов железа, которые специфически связываются с белками сыворотки. При добавлении феррозина образуется окрашенный комплекс, с максимумом поглощения при 560 нм, оптическая плотность которого пропорциональна концентрации оставшегося несвязанного железа. Разница между добавленным к сыворотке известным количеством железа и определенным в виде железоферрозинового комплекса соответствует железосвязывающей способности сыворотки (ЖСС).

Общая железосвязывающая способность сыворотки (ОЖСС) определяется как сумма ЖСС и количество железа в сыворотке.

1. Калибровочный раствор железа (89,5 мкмоль/л), 20 мл – 1 флакон; 

2. Буфер (0,5 М Трис), 100 мл – 1 флакон;

3. Раствор феррозина (30 г/л), 0,8 мл – 1 флакон.

Все реактивы готовы к использованию.

Линейность: в интервале от 0 до 150 мкмоль/л.

Воспроизводимость: коэффициент вариации в серии – 5%.

Для оценки правильности определения можно использовать контрольные сыворотки, аттестованные данным методом.

Нормальные величины железосвязывающей способности сыворотки крови:

– мужчины 45–75 мкмоль/л (250–400 мкг/100 мл);

– женщины на 10–15 % ниже, чем у мужчин.

Необходимо соблюдать правила техники  безопасности, рекомендуемые при работе с кровью в соответствии с «Инструкцией по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебных и профилактических учреждений», утвержденной Минздравом СССР от 17.01.91 г.

– Спектрофотометр, длина волны 562 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 560–580 нм, кювета с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм;

– водяной термостат, поддерживающий температуру 37° С.

– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02; 0,5 и 2,5 мл;

– пробирки пластмассовые одноразовые нестерильные вместимостью 5–10 мл;

– секундомер;

– вода дистиллированная;

– перчатки резиновые или пластиковые.

Негемолизированная сыворотка крови.

В пробирки вносят реактивы по следующей схеме:

 

При измерении оптической плотности использовать кюветы с толщиной  слоя 1 см.

Расчет железосвязывающей способности сыворотки крови производится по формуле:

         Dк - D2 + D1

ЖСС = 89,5 х --------------------  ,

                 Dк

где: ЖСС – железосвязывающая способность сыворотки опытной пробы, мкмоль/л;

        D1 – оптическая плотность опытной пробы без феррозина;

        D2 – оптическая плотность опытной пробы с феррозином;

        Dк – оптическая плотность калибровочной пробы;

        89,5 – содержание железа в калибровочном растворе, мкмоль/л.

Лабораторная посуда, используемая при измерениях, не должна содержать следов железа. 

При использовании кюветы меньшего объема расход реактивов может быть пропорционально уменьшен.

Если полученная величина ЖСС превышает 150 мкмоль/л, необходимо развести образец раствором хлористого натрия 9 г/л в соотношении 1:1 и повторить анализ. Полученный результат умножить на 2.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности.

Срок годности – 2 года.

Инструкция составлена: к.б.н. И.В. Смирновым – зав. лабораторией ГНЦ РАМН, к.х.н. Г.Н. Кольцовой – ст. научн. сотрудником ГНЦ РАМН, В.В. Гладуном  – главным технологом ООО «Агат-Мед».